Главная страница

Выбор правильного штамма продуцента. Выбор правильного штамма продуцента Существует много хостов экспрессии, доступных для E. coli


Скачать 16.37 Kb.
НазваниеВыбор правильного штамма продуцента Существует много хостов экспрессии, доступных для E. coli
Дата09.04.2019
Размер16.37 Kb.
Формат файлаdocx
Имя файлаВыбор правильного штамма продуцента.docx
ТипДокументы
#73248

Подборка по базе: Отений Я.Н. Выбор и расчёт захватных устройств промышленных робо, социология выборов зачет.docx, Тема 4. Теория потребительского выбора.docx, на выборы.docx, В РФ существует система специальных коррекционных учреждений для, Выбор правильного штамма продуцента.docx, Особенности выбора метода и средства для местного обезболивания , ВЫБОР МЕСТА ДЛЯ РЫБОВОДНОГО ПРЕДПРИЯТИЯ При выборе места для рыб, съемка выборов без Ситкиной и Корженковой.docx, Анализ конкурентоспособности товара при выборе целевого рынка.do.

Выбор правильного штамма продуцента

Существует много хостов экспрессии, доступных для E. coli . Эффективность экспрессии белка является результатом правильного выбора хозяина экспрессии. Все эти хосты имеют свои преимущества и недостатки. Неизменно, начальная экспрессия экспрессии белка анализируется с помощью BL21 (DE3) или производных штаммов линии К-12. Несколько основных характеристик клеток BL21: они лишены Lon протеазы, которая расщепляет многие чужеродные белки [ 33 ]. Линии К-12 также используются для проверки экспрессии основного белка. Штаммы AD494 и Origami являются мутантами trxB, которые способны усиливать образование дисульфидных связей в цитоплазме [34 ]. Другой источник линии К-12 - HMS174, мутантная версия recA, которая положительно влияет настабильностьплазмиды [ 35 ].

Большое количество бактериальных хозяев было отобрано и проверено на эффективную экспрессию белков.Некоторые из штаммов модифицированы для улучшения экспрессии рекомбинантного белка . Эти штаммы, как правило, дефектны по протеазе, такой как Lon или другая протеаза наружной мембраны, OmpT . Предпочтительным выбором хозяев экспрессии являются BL21 и его производные. Некоторые из штаммов хозяев обсуждаются подробно [ 36 , 37 ].

BL21 (DE3): этот штамм является одним из широко используемых штаммов для проверки экспрессии основного белка в E.coli . Хромосомная профаза DE3 экспрессирует РНК-полимеразу T7 под контролем промотора lacUV5.Замечено, что производным BL21 не хватает протеаз Lon и OmpT, которые стабилизируют экспрессию некоторых рекомбинантных белков. Предполагается, что при использовании этого штамма существует вероятность значительного базального уровня экспрессии Т7 или утечки. Добавление 1% глюкозы в питательную среду уменьшит утечку. Несмотря на то, что добавление 1% глюкозы рекомендуется для токсичных клонов, ее можно применять и к нескольким другим клонам, которые имеют выраженную утечку.

BL21 (DE3) pLysS: этот штамм имеет сходные характеристики BL21 (DE3). Однако pLysS продуцирует лизоцим T7 дикого типа для снижения базальной экспрессии T7 интересующего гена. Штамм BL21 (DE3) pLysS совместим с плазмидами, содержащими происхождение ColE1 или pMB1. Для культивирования BL21 (DE3) pLysS требуется хлорамфеникол.

Lemo21 (DE3): pLemo-плазмида продуцирует отрицательный по амидазе лизоцим T7 (lysY) из перестраиваемого промотора (Prha). Этот штамм совместим с плазмидами, содержащими происхождение ColE1 или pMB1.Большинство векторов рЕТ совместимы с этим штаммом. Хлорамфеникол требуется для поддержания этого штамма.

Ген РНК-полимеразы BL21-AI: T7 контролируется промотором ParaBAD. При использовании этого штамма, если используются векторы pET, IPTG также необходим для индукции для титрования репрессора LacI от промотора T7-lac на векторе. Этот штамм рекомендуется при использовании векторов pDEST

TOP10: это штаммы K - 12, которые не метаболизируют L-арабинозу, но могут обеспечить небольшое улучшение при экспрессии мембранного белка непосредственно из ParaBAD. Штамм подходит для векторов pBAD

C41 (DE3): эти штаммы являются производными BL21 (DE3), который имеет более низкие уровни РНК-полимеразы T7 в неиндуцирующих и индуцирующих условиях. В этом штамме добавление глюкозы не является необходимым, как в случае с BL21 (DE3).

Тюнер (DE3): Этот штамм представляет собой lacZY производное BL21. Мутация lac-пермеазы ( lac Y1) позволяет равномерно проникать IPTG во все клетки популяции, что приводит к зависимому от концентрации уровню индукции. Модифицированная версия этого штамма - Tuner (DE3) pLysS. Это должно экспрессировать лизоцим Т7 для контроля экспрессии Т7 в дополнение к мутации lac-пермеазы.

Rosetta2 и Rosetta pLysS: штаммы-хозяева Rosetta представляют собой производные BL21 lacZY (Tuner), предназначенные для усиления экспрессии белков, которые содержат редкие кодоны, используемые в E.coli. Эти штаммы экспрессируют тРНК редких кодонов на совместимой плазмиде CamR. В случае штамма pLysS редкие гены тРНК и ген лизоцима Т7 переносятся одной и той же плазмидой.

BL21 CodonPlus RIL и CodonPlus (DE3) –RIL / RIPL: BL21-Codon Plus сконструированы так, чтобы содержать дополнительные копии генов, которые кодируют тРНК, которые часто ограничивают трансляцию гетерологичных белков в E.coli, Клетки BL21-CodonPlus-RIL и BL21-CodonPlus (DE3) - RIL содержат дополнительные копии генов тРНК argU, ileY и leuW. Эти гены кодируют тРНК, которые распознают кодоны аргинина AGA и AGG, кодон изолейцина AUA и кодон лейцина CUA соответственно. Штаммы CodonPlusRIL имеют доступные тРНК, которые чаще всего ограничивают трансляцию гетерологичных белков из организмов, имеющих AT-богатые геномы. Клетки BL21-CodonPlus-RP и BL21-CodonPlus (DE3) -RP содержат дополнительные копии генов argU и proL. Эти гены кодируют тРНК, которые распознают кодоны аргинина AGA и AGG и кодон пролина CCC, соответственно. Штаммы CodonPlus-RP имеют тРНК, которые чаще всего ограничивают трансляцию гетерологичных белков организмов, имеющих геномы GCrich. Клетки BL21-CodonPlus (DE3) -RIPL содержат дополнительные копии argU, ileY и leuW, а также гены proL тРНК. Этот штамм восстанавливает экспрессию гетерологичных белков из организмов, которые имеют либо AT-, либо GC-богатые геномы. Некоторые особенности различных хостов экспрессии подробно представлены в таблице 1.


написать администратору сайта