Главная страница
Навигация по странице:

  • Дополнительный материал к занятию. Правила микроскопии с иммерсионной системой.

  • Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов.

  • Высушивание мазка .

  • Техника окраска по Граму в модификации Синёва.

  • Отношение бактерий к окраске по Граму.

  • Окраска по Цилю-Нильсену.

  • Работа студента на практическом занятии.

  • Занятие 2 Методы микроскопического исследования. Структура бактериальной клетки.

  • metodichka_stomat_микробиология. Учебнометодическое пособие по микробиологии, микробиологии полости рта для студентов


    Скачать 298.67 Kb.
    НазваниеУчебнометодическое пособие по микробиологии, микробиологии полости рта для студентов
    Анкорmetodichka_stomat_микробиология.docx
    Дата24.03.2018
    Размер298.67 Kb.
    Формат файлаdocx
    Имя файлаmetodichka_stomat_микробиология.docx
    ТипУчебно-методическое пособие
    #17159
    страница2 из 21
    1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   21

    1. Студенты должны приходить на кафедру в халатах, шапочках, иметь сменную обувь. Категорически запрещается работать в учебных лабораториях без халатов и шапочек, выпускать из-под спецодежды волосы, воротнички, курить, принимать напитки и пищу, пользоваться мобильной связью.


    2. Каждый студент имеет постоянное рабочее место в лаборатории. Из личных вещей студента на рабочем месте допускается наличие только данного пособия и рабочей тетради, в которой делаются записи и зарисовки. Ничего лишнего (в том числе учебников и других книг) на рабочем столе не должно быть.

    3. С собой нужно иметь: тетрадь для ведения дневника работы, тетрадь для тестовых заданий, цветные карандаши. Не разрешается вести записи красными чернилами или пастой.

    4. До начала работы необходимо проверить рабочее место, состояние микроскопа, о недостатках сообщить дежурным студентам и преподавателю.

    5. Работать аккуратно, экономно расходовать материалы и реактивы, по окончании работы гасить спиртовку. Необходимо проявлять максимальное внимание ко всем этапам работы с культурами и заражёнными микробами животными. Во время проведения посевов и приготовления мазков не разговаривать и не ходить по лаборатории. Все пробирки и чашки с посевами должны быть промаркированы. В случае загрязнения заразным материалом поверхности стола и других предметов, кожи рук и лица - обработать дезинфицирующим раствором и немедленно сообщить о случившемся преподавателю. Использованные пипетки, предметные и покровные стёкла, шпатели, ватные тампоны необходимо помещать в сосуды с дезинфицирующим раствором (пипетки – при полном погружении). Пинцеты, бактериальные петли, иглы после работы с исследуемым материалом необходимо прожигать в пламени горелки.

    6. В конце занятия надо привести в порядок рабочее место. Все предметы на рабочем столе разместить в том порядке, в каком они были до работы. Отработанный материал (культуры, микробный материал и др.) поместить в бикс для обеззараживания путём автоклавирования. Микроскоп привести в порядок и поместить в шкаф. Вылить в специальную ёмкость воду из лотков, обработать при необходимости руки дезинфицирующим раствором и вымыть их с мылом.

    Обязанности дежурного.

    1. Дежурные получают от лаборанта всё необходимое для работы, проверяют, всё ли в порядке.

    2. Устраняют все недостатки, возникающие в процессе работы.

    3. Собирают у студентов посевы, ставят в термостат; использованные посевы сдают лаборанту для обеззараживания путём автоклавирования.

    4. По окончании работы следят за тем, чтобы все рабочие места были приведены в порядок, микроскопы протёрты и поставлены на место.

    5. Сдают лабораторию лаборанту.
    Дополнительный материал к занятию.

    Правила микроскопии с иммерсионной системой.

    Настроить освещение микроскопа, используя вогнутое зеркало и объектив х8. Первоначально освещение настраивают при боковом осмотре верхней линзы конденсора. После этого при наблюдении в окуляр, изменяя положение зеркала, настраивают равномерную освещённость поля зрения.

    На приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами. Иммерсионное масло можно наносить только на сухой мазок.

    При помощи револьверного устройства установить иммерсионный объектив с увеличением 90.

    Осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла.

    Установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта.

    Провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь повреждение стекла или фронтальной линзы объектива (свободное расстояние иммерсионного объектива 0,1-1 мм).

    По окончании работы с микроскопом необходимо вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьверное устройство на объектив с малым увеличением (х8).

    Приготовление фиксированных препаратов

    из культур микроорганизмов.

    Приготовление окрашенного препарата из культуры микроорганизмов включает: 1) приготовление мазка, 2) высушивание мазка, 3) фиксацию, 4) окраску.

    Приготовление мазка. При приготовлении мазка из культуры микроорганизмов, выросшей на поверхности плотной питательной среды, на обезжиренное предметное стекло наносят петлёй небольшую каплю физиологического раствора, располагая её в центре круга, нарисованного с обратной стороны карандашом по стеклу. При работе спиртовка должна находиться прямо перед Вами, на удобном для работы расстоянии. Предметное стекло должно находиться в чашке Петри или лотке: категорически запрещается готовить мазки на предметном стекле, лежащем на столе! В правую руку берут бактериологическую петлю, в левую - пробирку с культурой. Петлю стерилизуют, внося её в пламя горелки в вертикальном положении. После того как петля раскалится докрасна, проводят конец петледержателя через пламя. После этого из пробирки вынимают пробку, удерживая её мизинцем правой руки. После обжигания на спиртовке края пробирки в неё вносят петлю, которую охлаждают, прикасаясь к стенкам пробирки. Затем петлёй с поверхности среды снимают небольшое количество культуры. Не касаясь стенок пробирки, вынимают петлю и закрывают пробирку пробкой над спиртовкой. После этого пробирку с культурой помещают в штатив, а культуру на петле вносят в приготовленную заранее каплю физиологического раствора, хорошо размешивают и равномерно распределяют по стеклу в виде небольшого круга или овала 1–1,5 см в диаметре. По окончании приготовления мазка петлю вновь стерилизуют в пламени спиртовки.

    Для приготовления мазка из бульонной культуры на предметное стекло наносят 1–2 петли исследуемого материала, стерилизуя петлю перед каждым погружением в бульонную культуру микроорганизма, как описано выше, и равномерно распределяют по стеклу (в этом случае не требуется предварительного нанесения на стекло физиологического раствора).

    Высушивание мазка. Высушивание мазка производится на воздухе. Для ускорения высушивания предметное стекло с мазком, обращённым кверху, можно подержать в струе тёплого воздуха высоко над пламенем спиртовки, не внося препарат в пламя.

    Фиксация мазка. Для этого используют физический и химический методы. Физический метод заключается в фиксации мазка над пламенем спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх (троекратно по 1 секунде). Эту операцию проводят достаточно быстро, стараясь не перегреть мазок, так как при перегревании могут произойти изменения морфологии клетки. Химический метод фиксации является более мягким по сравнению с фиксацией на пламени. В качестве фиксаторов используют этанол, ацетон, смесь Никифорова (эквивалентное соотношение этанола и эфира), метанол, формалин. После фиксации мазок можно окрашивать.

    Окраска мазка. Для окраски мазка следуют предписаниям для каждой методики окраски. При окраске простым способом на мазок наносят несколько капель раствора красителя так, чтобы весь мазок был покрыт им. Краситель оставляют на определённое время. Затем препарат промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой.

    Техника окраска по Граму в модификации Синёва.

    1. На фиксированный препарат наносят 2-3 капли воды и кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанной краской генцианвиолет. Окрашивают 1-2 минуты.

    2. Снимают бумажку, сливают краску и, не промывая водой, наливают на препарат раствор Люголя на 1 минуту.

    3. Сливают раствор Люголя и наливают на препарат спирт с йодом на 30 секунд. Промывают водой.

    4. После этого окрашивают мазок водным фуксином в течение 1 минуты.

    5. Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют. В результате окраски грамположительные микробы окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

    Отношение бактерий к окраске по Граму.

    Кокки окрашиваются по Граму положительно, за исключением гонококков и менингококков. Палочки, не образующие спор, грамотрицательны, за исключением палочек дифтерии, туберкулёза и проказы. Палочки, образующие споры (бациллы и клостридии), - грамположительны. Извитые формы (вибрионы и спириллы) грамотрицательны.

    Окраска по Цилю-Нильсену.

    1. На фиксированный препарат помещают полоску фильтровальной бумаги, наливают карболовый фуксин Циля и осторожно нагревают на горелке до появления пара, не допуская кипения жидкости. Нагревание повторяют 3 раза.

    2. Снимают бумагу, промывают водой.

    3. Погружают 3 раза в 5% раствор серной кислоты.

    4. Промывают препарат водой и докрашивают метиленовой синью 5 минут.

    5. Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют.
    Контрольные вопросы.

    Перечислите и охарактеризуйте основные этапы развития микробиологии. Назовите основные открытия Л. Пастера, Р. Коха, И.И. Мечникова. Заслуги отечественных учёных в развитии микробиологии. Назовите отрасли микробиологии, разделы медицинской микробиологии. Значение микробиологии в работе врача-стоматолога. Положение микроорганизмов среди других живых существ. Перечислите основные группы микроорганизмов. По каким признакам отличаются между собой эукариоты и прокариоты? Основные формы бактерий. Как называется кокки, располагающиеся: попарно, цепочкой, гроздьями, по четыре, пакетами? Как называются палочки, образующие споры? Как называются палочки, не образующие споры? Как называются извитые формы с одним завитком спирали? Как называются извитые формы с несколькими завитками? Методы исследования в микробиологии. Микроскопический метод: что изучает, с помощью чего? Устройство светового микроскопа. Что такое иммерсионная система? Правила работы с иммерсионной системой. Что такое разрешающаяспособность микроскопа и чему она равна у микроскопа с иммерсионной системой? Какова роль иммерсионного масла? Каким свойством должно обладать иммерсионное масло? Куда помещают иммерсионное масло при микроскопии? Нужно ли применять иммерсионное масло при микроскопии с объективом: x8, x40, x90?

    Этапы приготовления препарата-мазка. Для чего фиксируют мазок? Способы фиксации мазков. Какие способы окраски называются простыми? Какие красители применяются для окраски бактерий? Какие способы окраски называются сложными, на чём они основаны? Как производится окраска по Граму в модификации Синёва: в какой цвет окрашиваются грамположительные бактерии, почему? В какой цвет окрашиваются грамотрицательные бактерии, почему? Чем обусловлена способность бактерий различно окрашиваться по Граму? Какие бактерии (кокки, палочки, извитые) красятся по Граму положительно и какие отрицательно? Из каких слоёв состоит клеточная стенка грамположительных и грамотрицательных бактерий? Принцип и техника окраски по Цилю-Нильсену. Какие патогенные бактерии являются кислотоустойчивыми?
    Работа студента на практическом занятии.

    1. Промикроскопируйте демонстрационные мазки - препараты различных форм бактерий: круглые (стафилококк, сарцина, стрептококк), палочковидные (кишечная палочка, стрептобациллы), извитые (вибрионы). К рисункам сделайте подписи: название бактерии, способ окраски, увеличение микроскопа.

    2. Заполните в тетради таблицу: «Место микробов среди других живых существ».

    3. Опыт окраски по Граму в модификации Синёва.

    Цель опыта: определить, имеет ли метод Грама преимущество перед простым методом и в чём оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение этого метода.

    Материалы: стафилококки (грамположительные бактерии) и кишечные палочки (грамотрицательные бактерии).

    Ход опыта: приготовить 2 одинаковых мазка из смеси стафилококков и кишечных палочек; один мазок окрасить водным фуксином, другой - по Граму в модификации Синёва. Микроскопировать.

    Результат: 2 рисунка и описание их.

    Вывод: содержит ответы на вопросы, поставленные в цели опыта.

    4. Опыт окраски по Цилю-Нильсену.

    Цель опыта: определить имеет ли метод Циля-Нильсена преимущество перед простым методом и в чём оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение этого метода.

    Материалы: 2 одинаковых мазка из смеси туберкулёзной палочки (кислотоустойчивые бактерии) и кишечной палочки (кислотоподатливые бактерии)

    Ход опыта: окрасить один мазок простым способом (метиленовой синью), другой - по Цилю-Нильсену. Микроскопировать.

    Результат: 2 рисунка и описание их.

    Вывод: содержит ответы на вопросы, поставленные в цели опыта.
    Занятие 2

    Методы микроскопического исследования. Структура бактериальной клетки.

    1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   21
    написать администратору сайта