Главная страница
Навигация по странице:

  • Работа 1. Биуретовая реакция (реакция Пиотровского).

  • Работа 2. Нингидриновая реакция.

  • Работа 3. Ксантопротеиновая реакция (реакция Мульдера)

  • Работа 4. Реакция на тирозин (реакция Миллона)

  • Работа 5. Диазореакция на гистидин и тирозин (реакция Паули)

  • Работа 6. Реакции на триптофан

  • Работа 7. Реакция Фоля на содержащие серу аминокислоты

  • Название реакции Используемые реактивы Окраска продукта

  • лабораторная работа 1 АМИНОКИСЛОТЫ стац.Би. лабораторная работа 1 АМИНОКИСЛОТЫ стац. Качественные реакции на аминокислоты и белки


    Скачать 3.97 Mb.
    НазваниеКачественные реакции на аминокислоты и белки
    Анкорлабораторная работа 1 АМИНОКИСЛОТЫ стац.Би.rtf
    Дата28.01.2017
    Размер3.97 Mb.
    Формат файлаrtf
    Имя файлалабораторная работа 1 АМИНОКИСЛОТЫ стац.Би.rtf
    ТипДокументы
    #857

    КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА АМИНОКИСЛОТЫ И БЕЛКИ
    Цель работы: изучить качественные реакции, используемые для обнаружения белков и определения их аминокислотного состава
    Цветные реакции
    Для обнаружения белка применяют цветные реакции, которые делят на два типа: общие или универсальные и специфические. К универсальным реакциям относятся биуретовая (на пептидную связь) и нингидрировая (на α-аминокислоты). С их помощью можно обнаружить любой белок. К специфическим относятся реакции на отдельные аминокислоты, которые позволяют обнаружить специфические функциональные группы в составе радикалов аминокислот.Цветные реакции на белки лежат в основе методов установления белковой природы веществ, изучения аминокислотного состава и количественного содержания белков.
    Работа 1. Биуретовая реакция (реакция Пиотровского).

    В щелочной среде белки, а также продукты их гидролиза (полипептиды) дают фиолетовое или красно-фиолетовое окрашивание с сульфатом меди. Реакция обусловлена присутствием в балках пептидных связей, которые образуют окрашенные солеобразные комплексные соединения. Интенсивность окраски зависит от количества пептидных связей в молекуле и количества медной соли.

    Свое название реакция получила от производного мочевины – биурета, который дает эту реакцию. Биурет образуется при нагревания мочевины с отщеплением от нее аммиака:
    1
    Две молекулы диенольной формы биурета взаимодействуют с образующимся в щелочной среде гидроксидом меди (II). Продуктом реакции является комплексное соединение (окрашенная медно-натриевая соль биурета), в котором координационные связи образованы за счет электронных пар атомов азота иминных групп:

    1

    Подобным образом построены окрашенные медно-натриевые соли пептидов и белков.

    Биуретовую реакцию дает также аспарагин (амид аспарагиновой кислоты) и аминокислоты гистидин, серии, треонин.

    Ход работы. В одну пробирку наливают 10-12 капель раствора яичного или растительного белка, в другую насыпают 20-30 мг мочевины и нагревают на спиртовке до исчезновения запаха аммиака и охлаждают. В обе пробирки добавляют по 10 капель 10-процентного раствора гидроксида натрия и по 1-2 капли 1-процентного раствора сульфата меди (II). В обеих пробирках появляется сине-фиолетовое или красно-фиолетовое окрашивание.
    Работа 2. Нингидриновая реакция.

    Белки, полипептиды и аминокислоты при нагревании с нингидрином дают синее и сине-фиолетовое окрашивание. Нингидриноваяреакция обусловлена наличием α-аминокислот и является одной из наиболее чувствительных для обнаружения α-аминогрупп.

    Сущность реакции заключается в том, что α-аминокислоты и пептиды, реагируя с нингидрином, подвергаются окислительному дезаминированию и декарбоксилированию:


    Восстановленный нингидрин взаимодействует с аммиаком и второй молекулой нингидрина, в результате чего образуется сложное окрашенное соединение мурексидного строения:
    1
    Ход работы. В две пробирки наливают: в одну 10 капель раствора яичного или растительного белка, в другую 10 капель 0,1-процентного раствора глицина. В каждую из них добавляют по 2-3 капли 0,1-процентного раствора нингидрина и нагревают. Через 1-2 мин появляется розовое, затем красное, а затем синее окрашивание.
    Работа 3. Ксантопротеиновая реакция (реакция Мульдера)

    При нагревании растворов большинства белков с концентрированной азотной кислотой образуется желтое окрашивание, переходящее в щелочном растворе в оранжевое.

    Реакция обусловлена присутствием циклических аминокислот, которые при взаимодействии с азотной кислотой образуют нитропроизводные желтого цвета, например:
    1
    Продукты нитрования циклических аминокислот, реагируя с едким натром или гидроксидом аммония, образуют соответствующие соли, имеющие оранжевую окраску:
    1
    Ход работы. В пробирку наливают 8-10 капель яичного или растительного белка, добавляют З-5 капель концентрированной азотной кислоты и нагревают. В пробирке появляется желтое окрашивание. После охлаждения к смеси добавляют избыток концентрированного раствора аммиака или 30-процентного раствора гидроксида натрия. Желтая окраска переходит в оранжевую.
    Работа 4. Реакция на тирозин (реакция Миллона)

    Нагревание большинства белков с реактивом Миллона (раствор нитратов и нитритов ртути (I) и (II) в азотной кислоте) приводит к образованию красного осадка.

    Реакция обусловлена присутствием в белке аминокислоты тирозина, которая при взаимодействии с реактивом Миллона дает нитрозопроизводное, ртутное соединение которого окрашено в красный цвет:
    1
    Ход работы.К 8-10 каплям раствора белка добавляют 2-3 капли реактиваМиллона и осторожно нагревают. Жидкость окрашивается в красный цвет и выпадает красно-коричневый осадок.
    Работа 5. Диазореакция на гистидин и тирозин (реакция Паули)

    При добавлении к щелочному раствору белка диазореактива жидкость приобретает оранжево-красное окрашивание.

    Реакция обусловлена присутствием в белке аминокислот гистидина и тирозина, которые, реагируя с диазобензолсульфокислотой,образуют азокраситель красного цвета:
    1
    Ход работы. К свежеприготовленному диазореактиву (3 капли 1-процентного раствора сульфаниловой кислоты в 2-процентном растворе соляной кислоты и 3 капли 5-процентного раствора нитрита натрия) добавляют 6-8 капель раствора белка и после перемешивания 3-5 капель 10-процентного раствора карбоната натрия. Развивается интенсивная красная окраска.

    Работа 6. Реакции на триптофан

    Реакции основаны на способности триптофана в кислой среде вступать во взаимодействие с альдегидами, образуя при этом окрашенные продукты конденсации.

    а) Реакция Адамкевича. Взаимодействие триптофана с глиоксиловой кислотой (которая всегда присутствует в ледяной уксусной кислоте) приводит к образованию соединения красно-фиолетового цвета:
    1

    Ход работы. К 5-6 каплям раствора белка добавить 5 капель концентрированной уксусной кислоты, слегка подогреть и подслоить (осторожно!!! по стенке наклоненной пробирки) равный объем концентрированной серной кислота. На границе двух слоев жидкости появляется красно-фиолетовое кольцо.

    б) Реакция Шульца-Распайля. Триптофан, взаимодействуя с оксиметилфурфуролом (образующимся при гидролизе сахарозы и обезвоживании моносахаридов под действием концентрированной серной кислоты) образует комплекс вишнево-красного цвета.

    Ход работы.К 5-6 каплям раствора белка приливают 1 каплю 10- процентного раствора сахарозы и подслаивают 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе раздела жидкостей появляется вишнево-красное окрашивание.
    Работа 7. Реакция Фоля на содержащие серу аминокислоты

    Нагревание белка со щелочью и плюмбитом приводит к появлению бурого или черного осадка. Реакция обусловлена наличием в белке содержащих серу аминокислот, которые под действием щелочи разрушаются с образованием сульфида щелочного металла; последний с плюмбитом дает осадок сульфида свинца:

    1

    Pb(CH3COO)2 + 4 NaOH → Na2[Pb(OH)4]

    Na2[Pb(OH)4] + Na2S → PbS↓ + 4 NaOH
    Ход работы.К 5-6 каплям раствора белка добавляют 10 капель 30-процентного раствора гидроксида натрия и 1каплю 5-процентного раствора ацетата свинца. При длительном нагревании выпадает черный осадок сульфида свинца.
    Контрольное определение
    С контрольным раствором белка проводят все изученные реакции на аминокислоты и белки, на основании чего делается вывод об аминокислотном составе белка. Результаты опытов заносят в таблицу.



    Название реакции

    Используемые реактивы

    Окраска

    продукта

    Чем обусловлена реакция
































    Содержание отчета:

    Отчет составляется с указанием цели работы, включает уравнения протекания реакций, экспериментальные данные и выводы. Выводы содержат данные об аминокислотном составе белков и возможности их обнаружения цветными реакциями.
    написать администратору сайта